礬根可以通過葉插進(jìn)行繁殖，雖然可以大規(guī)模繁殖，但成株慢，很難長(zhǎng)葉長(zhǎng)芽，成活率低。其次，還可以通過播種和分株繁殖，但是都耗時(shí)長(zhǎng)，難度大，給大規(guī)模繁殖造成困難。為加快礬根的繁殖速度和質(zhì)量，更好的滿足生產(chǎn)需求,對(duì)此采用植物組培快繁技術(shù)進(jìn)行研究，可以在短時(shí)間內(nèi)可以實(shí)現(xiàn)植株大量繁殖，對(duì)于“名,優(yōu),特,新,稀”等植物品種的繁殖有巨大的意義,進(jìn)而可以解決國(guó)內(nèi)市場(chǎng)礬根數(shù)量少，引進(jìn)價(jià)格貴的問題，并為礬根大規(guī)模生產(chǎn)提供理論依據(jù)和參考價(jià)值。

  1 材料與方法

  1.1 試驗(yàn)材料

  試驗(yàn)于2016年8月引進(jìn)礬根“狂野”(Heuchera micrantha ‘Rave On’),“萊姆里奇”(Heuchera micrantha ‘Lime Rickey’),“黃桃派”(Heuchera micrantha ‘Peach Pie’)和“喬治亞桃子”(Heuchera micrantha ‘Georgia Peach’)四個(gè)品種栽種于安康學(xué)院江北校區(qū)溫室大棚內(nèi)，栽培基質(zhì)采用營(yíng)養(yǎng)土∶黃泥土∶沙土=1∶1∶1,棚內(nèi)溫度控制在15 ℃～30 ℃之間，期間保持空氣濕度50%～80%，基質(zhì)含水量在50%左右。組培試驗(yàn)于2017年4月采集四個(gè)礬根莖段作為組培快繁的外植體材料。

  1.2 試驗(yàn)方法

  1.2.1 礬根初代培養(yǎng)誘導(dǎo)試驗(yàn)設(shè)計(jì)從日光溫室里種植的四種礬根植株上選取生長(zhǎng)健康的莖段作為外植體。用流水沖洗干凈，將外植體轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)，用75%酒精清洗30 s，用無菌水清洗3次后備用。以MS為培養(yǎng)基，添加3種不同激素配方進(jìn)行培養(yǎng)，共12個(gè)處理。接種后置于已滅菌的培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)條件溫度在25±2 ℃之間，空氣相對(duì)濕度55%左右。

  1.2.2 礬根繼代培養(yǎng)試驗(yàn)設(shè)計(jì)選取初代很佳配方培養(yǎng)四種礬根莖段30 d后，以MS為基本培養(yǎng)基，添加3種不同配方的培養(yǎng)基對(duì)進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)處理接種30瓶，共12個(gè)處理，30 d后統(tǒng)計(jì)出芽個(gè)數(shù)計(jì)算其增殖系數(shù)，確定很佳繼代培養(yǎng)基的激素配方，培養(yǎng)條件同前。

  1.2.3 礬根生根培養(yǎng)基的篩選及煉苗方法選取出芽較好的礬根組培苗，接種于1/2 MS+IBA 1.5 mg·L-1+NAA 1 mg·L-1培養(yǎng)基上，培養(yǎng)條件同前。30 d后調(diào)查其株高，葉片數(shù)，發(fā)根數(shù)根長(zhǎng)等指標(biāo)。

  移栽前，在組培室內(nèi)去掉培養(yǎng)瓶的蓋子3 d后，將組培苗從瓶?jī)?nèi)取出，洗去根部的瓊脂培養(yǎng)基，將其移入泥炭和珍珠巖為1:1的基質(zhì)中，進(jìn)行移栽后的養(yǎng)護(hù)管理。

  1.3 統(tǒng)計(jì)方法

  采用隨機(jī)抽樣法，抽取3組，每組3瓶，統(tǒng)計(jì)計(jì)算每個(gè)品種的誘導(dǎo)率，增殖系數(shù)，生根率，葉片數(shù)，株高，根數(shù)和根長(zhǎng)，其中誘導(dǎo)率、增殖系數(shù)和生根率指標(biāo)計(jì)算方法如下：

  誘導(dǎo)率=誘導(dǎo)成功的礬根莖段總數(shù)/接種的礬根莖段總數(shù)×100%

  增殖系數(shù)=組培苗在一個(gè)周期內(nèi)形成的有效芽數(shù)/接種塊數(shù)×100%(有效苗數(shù)為帶3～4片葉的小苗)

  生根率=生根的礬根總數(shù)/接種的總苗數(shù)×100%

  試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用EXCEL 2013和SPSS 19軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

  2 結(jié)果分析

  2.1 四種礬根初代培養(yǎng)誘導(dǎo)試驗(yàn)結(jié)果

  四種礬根材料取莖段以MS為培養(yǎng)基，添加3種不同激素濃度配方進(jìn)行培養(yǎng)。接種30 d后，統(tǒng)計(jì)其不同品種在不同激素配方條件下的愈傷組織誘導(dǎo)率，結(jié)果見表1。

  表1 不同激素配方對(duì)四種礬根初代培養(yǎng)誘導(dǎo)率的影響

  注：A品種名為“狂野”,B品種名為“萊姆里奇”,C品種名為“黃桃派”，D品種名為“喬治亞桃子”，下同。

  采用雙因素有重復(fù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)利用EXCEL進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)表1試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，四個(gè)品種在不同激素配方條件下的誘導(dǎo)率差異不顯著，而不同激素配方對(duì)四個(gè)品種的影響達(dá)到極顯著差異，兩因素互作差異不顯著。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果中6-BA0.5 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1的誘導(dǎo)效果很好，四個(gè)品種的平均誘導(dǎo)率達(dá)到84.05%，可作為誘導(dǎo)四個(gè)品種的愈傷組織誘導(dǎo)的很佳培養(yǎng)配方。誘導(dǎo)結(jié)果如圖1。

  2.2 四種礬根繼代培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果

  將初代培養(yǎng)獲得的愈傷組織轉(zhuǎn)入添加不同激素配方的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)30 d，對(duì)不同激素配方下的四種礬根品種的增殖系數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，確定繼代培養(yǎng)基適宜的激素配方，結(jié)果見表2。

  圖1 四個(gè)礬根品種愈傷組織誘導(dǎo)情況

  表2 不同激素配方對(duì)四種礬根繼代培養(yǎng)增殖系數(shù)的影響

  經(jīng)SPSS 19對(duì)品種與激素配方兩個(gè)因素有重復(fù)的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明：品種間差異存在顯著差異，其中B品種“萊姆里奇”增殖系數(shù)最高，平均可達(dá)3.48，A品種“狂野”次之，C品種“黃桃派”和D品種“喬治亞桃子”差異不顯著;不同激素配方間差異顯著，其中采用6-BA0.2 mg·L-1 +NAA0.05 mg·L-1的誘導(dǎo)率達(dá)4.2，效果很好，6-BA0.2 mg·L-1 +NAA0.01 mg·L-1，誘導(dǎo)效果最差，誘導(dǎo)效果見圖2。

  圖2 四個(gè)礬根品種繼代培養(yǎng)誘導(dǎo)率情況

  統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，品種與激素之間的互作差異顯著，進(jìn)一步分析兩因素的互作效應(yīng)，其中B品種萊姆里奇采用6-BA0.2 mg·L-1 +NAA 0.05 mg·L-1的誘導(dǎo)率最高，可達(dá)5.83，C品種“黃桃派”采用6-BA0.2 mg·L-1 +NAA0.01 mg·L-1的誘導(dǎo)效果最差，分析結(jié)果見圖3。

  
   圖3 繼代培養(yǎng)不同激素配方與礬根品種間增殖系數(shù)互作效應(yīng)結(jié)果

  2.3 四種礬根生根培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果

  將叢生芽發(fā)出較好的的四個(gè)品種切分為帶3-4片葉的芽簇，接入1/2 MS+IBA 1.5 mg·L-1+NAA 1 mg·L-1培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)30 d后四個(gè)不同品種生根情況見圖4。

  圖4 四個(gè)礬根品種組培生根誘導(dǎo)情況

  對(duì)四個(gè)品種的生根等生理指標(biāo)進(jìn)行調(diào)查統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表3。表3結(jié)果表明，四個(gè)品種在1/2 MS+IBA 1.5 mg·L-1+NAA 1 mg·L-1生根率、平均葉片數(shù)、平均發(fā)根數(shù)、株高、根長(zhǎng)等有一定差異，其中品種B 萊姆里奇除根長(zhǎng)外，其它指標(biāo)均為很佳，表明此品種采用1/2 MS+IBA 1.5 mg·L-1+NAA 1 mg·L-1效果很好。

  表3 四個(gè)礬根品種組培生根誘導(dǎo)情況

  3 討論

  3.1 不同激素配方對(duì)礬根愈傷組織誘導(dǎo)的影響

  以礬根帶莖尖幼嫩莖段為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基，研究了不同激素配比條件下礬根的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)。結(jié)果表明：適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5 mg·L-1+NAA0.05 mg·L-1。以柔毛礬根‘香茅’和‘飴糖’為試材，對(duì)其組培快繁技術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)研究。結(jié)果表明：以溫室采集的芽作為外植體較適宜;初代培養(yǎng)很佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA0.2 mg·L-1本實(shí)驗(yàn)與之不同的是NAA含量不同，因?yàn)樵囼?yàn)中預(yù)備試驗(yàn)中NAA達(dá)到0.2 mg·L-1時(shí)仍未誘導(dǎo)成功后將NAA含量調(diào)高至0.5 mg·L-1，6-BA和NAA為1:1的比例，試驗(yàn)結(jié)果顯示，礬根“狂野”、“萊姆里奇”、“黃桃派”和“喬治亞桃子”誘導(dǎo)率均為良好。

  3.2 不同激素配方對(duì)礬根增殖系數(shù)的影響

  以柔毛礬根‘香茅’和‘飴糖’為試材，其增殖系數(shù)最低可達(dá)6.2以上，與本試驗(yàn)差異較大，其原因?yàn)榻y(tǒng)計(jì)方法不同。由于礬根叢生芽多，試驗(yàn)按照每株3～4個(gè)芽為一株，故統(tǒng)計(jì)結(jié)果遠(yuǎn)小于王晶的試驗(yàn)結(jié)果，且本試驗(yàn)所采用的激素配方與其試驗(yàn)也有很大不同，原因可能與礬根不同品種和不同外植體有關(guān)，可以作更進(jìn)一步的探究。

  3.3 不同培養(yǎng)基對(duì)礬根生根誘導(dǎo)的影響

  王晶[4]等以柔毛礬根‘香茅’和‘飴糖’為試材，對(duì)其組培快繁技術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)研究，生根階段的很佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA1.5 mg·L-1。孟清秀為加快礬根的繁殖速度和質(zhì)量，更好的滿足生產(chǎn)需求，以‘瀑布’、‘飴糖’、‘紫色宮殿’3個(gè)礬根品種的莖尖為外植體，以MS培養(yǎng)基研究了不同激素配比條件下礬根的組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，‘瀑布’、‘飴糖’、‘紫色宮殿’的很佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.3 mg·L-1+AC1.0 g·L-1。本試驗(yàn)前期也試著用上述激素配方做預(yù)備試驗(yàn)，但結(jié)果均不理想。本次試驗(yàn)采用1/2 MS+IBA 1.5 mg·L-1+NAA 1 mg·L-1雖誘導(dǎo)出根，但未必為很佳培養(yǎng)方案，可在后繼做進(jìn)一步研究。

  4 結(jié)論

  研究針對(duì)四種礬根材料開展組培快繁技術(shù)研究，其結(jié)果為6-BA0.5 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1的誘導(dǎo)效果很好，四個(gè)品種的平均誘導(dǎo)率達(dá)到84.05%，可作為誘導(dǎo)四個(gè)品種的愈傷組織誘導(dǎo)的很佳培養(yǎng)配方;采用不同激素配方對(duì)四個(gè)品種增殖情況誘導(dǎo)結(jié)果表明：品種間差異存在顯著差異，其中B品種“萊姆里奇”增殖系數(shù)最高，平均可達(dá)3.48，不同激素配方間差異顯著，其中采用6-BA0.2 mg·L-1 +NAA0.05 mg·L-1的誘導(dǎo)率達(dá)4.2，效果很好，生根培養(yǎng)基配方為1/2 MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 1 mg·L-1四個(gè)品種平均誘導(dǎo)率可達(dá)74.13%。