2 我國櫸樹組培快繁技術(shù)研究現(xiàn)狀

  2.1 外植體的選擇和消毒時間對組培快繁影響的研究

  如何選擇外植體以及外植體的消毒方式對櫸樹的組培快繁來說非常重要。不同的外植體類型、采樣時間和消毒方式都會影響櫸樹組織培養(yǎng)的結(jié)果。曾用大葉櫸未成熟胚以及種子的子葉、胚軸、頂芽、嫩枝葉片和莖段等不同外植體，對影響愈傷組織誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)的因素進行了探討，結(jié)果表明：不同外植體的愈傷組織誘導(dǎo)能力存在一定差異，其誘導(dǎo)率按由低到高的順序排列依次為子葉、胚軸、葉片、莖段和頂芽。選擇初春已展葉的新芽、秋季抽梢萌發(fā)的秋芽、當年生幼嫩帶芽莖段，對黃色品系櫸樹不同外植體誘導(dǎo)不定芽發(fā)生進行了研究，結(jié)果表明進行其芽誘導(dǎo)培養(yǎng)最適合的外植體是當年生枝條的帶芽莖段。通過選擇成年大葉櫸的腋芽、莖段和葉片以及實生幼苗大葉櫸的頂芽、莖段、葉片，研究了不同外植體對其組織培養(yǎng)的影響，結(jié)果表明，成年型外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率明顯低于幼年型外植體;不同類型的幼年型外植體誘導(dǎo)率也不同,按大小排序依次為:頂芽>莖段>葉片。

  以當年生帶芽莖段為外植體材料，分別于4月中旬、8月中旬和12月中旬進行取材，進行不同取材時間對芽誘導(dǎo)的影響實驗。結(jié)果表明：4月是櫸樹較適宜的外植體采集時間，76.67%的外植體材料萌芽，組織培養(yǎng)成功率較高。]分別于3月、5月、8月、11月進行取材,在相同培養(yǎng)基、培養(yǎng)時間和培養(yǎng)條件下進行愈傷組織誘導(dǎo)，研究了不同采樣時間對愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明：3月是大葉櫸很好的采樣時期,愈傷組織誘導(dǎo)率最高,為95.8%,污染率最低,為3%,且生長良好。

  分別研究了不同消毒時間對櫸樹組織培養(yǎng)的影響。羅雪梅認為，帶芽莖段進行芽誘導(dǎo)試驗中，消毒效果很好的方法是70%酒精30 s與0.1%升汞消毒3 min。汪靈丹認為，70%酒精30 s與0.1%升汞8～10 min左右,基本上能達到較好的消毒效果。

  2.2 培養(yǎng)基和激素種類對組培快繁影響的研究

  適宜的基本培養(yǎng)基和植物激素是櫸樹組培技術(shù)能否成功的關(guān)鍵,基本培養(yǎng)基和植物激素不同,組培快繁的結(jié)果也不盡相同。用經(jīng)常規(guī)消毒的成年櫸樹當年生嫩枝，接種于附加不同質(zhì)量濃度的激素BA、NAA、2,4-D的MS的培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)莖尖萌芽。其研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：MS+BA(1.0 mg/L)為誘導(dǎo)芽萌發(fā)的最適宜培養(yǎng)基, MS+BA(0.5 mg/L)+CH(500 mg/L)為最適壯苗培養(yǎng)基, 1/2MS+IBA(0.5 mg/L)為最適生根培養(yǎng)基。用頂芽作為外植體，就不同培養(yǎng)基和激素濃度對芽體的誘導(dǎo)、增殖系數(shù)的影響等方面進行試驗研究，其結(jié)果表明：頂芽萌芽和增殖培養(yǎng)均受到不同培養(yǎng)基和激素濃度的影響，其中WPM+BA(1.0 mg/L)是很佳頂芽萌芽培養(yǎng)基,萌芽率最高可達98.3%, WPM+BA(4.0 mg/L)是很佳增殖培養(yǎng)基,很大增值系數(shù)為15。選用帶芽莖段為外植體材料進行櫸樹組培快繁研究，其研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：誘導(dǎo)芽萌發(fā)的最適宜的培養(yǎng)基為MS+BA(0.5 mg/L)或MS+BA(1.0 mg/L),增殖培養(yǎng)基是MS+BA(0.5 mg/L)，壯苗培養(yǎng)基為MS+BA(0.5 mg/L)+0.5GA3(500 mg/L),生根培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA(0.5 mg/L)+活性炭0.1 g/L。劉雪梅等[11]以當年生帶芽莖段為外植體材料,進行了櫸樹不定芽的直接誘導(dǎo)試驗.結(jié)果表明: MS+BA (2.25～4.50μmol/L)為適合的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基,有效芽誘導(dǎo)率達到76.67%;MS+BA (2.25 μmol/L)為最適繼代增殖培養(yǎng)基,增殖系數(shù)為5.1;MS+BA (2.25 μmol/L)+GA3(1.45μmol/L)為最適壯苗培養(yǎng)基;1/2 MS+NAA(2.69 μmol/L)+活性炭0.1 g/L為最適生根培養(yǎng)基,生根率和生根數(shù)分別達到77.78%與4.5條.

  3 櫸樹組培快繁技術(shù)的發(fā)展趨勢

  雖然我國櫸樹的組織培養(yǎng)已經(jīng)在實驗室取得了初步成功，但仍面臨諸多問題，如相應(yīng)投資大，成本高， 技術(shù)性強，需有溫室等一系列配套設(shè)施等，因此真正應(yīng)用于工廠化生產(chǎn)還有待進一步的研究。①為適應(yīng)生產(chǎn)的需要，可以進一步擴大櫸樹優(yōu)良品系(種)的外植體的篩選范圍，以培育出更多優(yōu)良品種的櫸樹組培苗。②進行櫸樹不同品系的組織培養(yǎng)，以探討不同櫸樹品系在組培快繁關(guān)鍵技術(shù)等方面的差異顯著性。③在櫸樹的生理生化和分子機制等方面加強基礎(chǔ)理論研究，這些問題的突破將會有利于櫸樹樹種的改良。④為了使櫸樹組織培養(yǎng)技術(shù)盡快應(yīng)用到實際的生產(chǎn)中，要進一步簡化、優(yōu)化培養(yǎng)程序，降低成本。盡管目前櫸樹組培快繁技術(shù)的工廠化應(yīng)用是比較困難的,但是隨著生物技術(shù)及其手段的不斷發(fā)展,櫸樹的組織培養(yǎng)工廠化快速繁殖生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)櫸樹苗木已指日可待。