礬根可以通過葉插進(jìn)行繁殖，雖然可以大規(guī)模繁殖，但成株慢，很難長葉長芽，成活率低。其次，還可以通過播種和分株繁殖，但是都耗時(shí)長，難度大，給大規(guī)模繁殖造成困難。為加快礬根的繁殖速度和質(zhì)量，更好的滿足生產(chǎn)需求,對此采用植物組培快繁技術(shù)進(jìn)行研究，可以在短時(shí)間內(nèi)可以實(shí)現(xiàn)植株大量繁殖，對于“名,優(yōu),特,新,稀”等植物品種的繁殖有巨大的意義,進(jìn)而可以解決國內(nèi)市場礬根數(shù)量少，引進(jìn)價(jià)格貴的問題，并為礬根大規(guī)模生產(chǎn)提供理論依據(jù)和參考價(jià)值。

  1 材料與方法

  1.1 試驗(yàn)材料

  試驗(yàn)于2016年8月引進(jìn)礬根“狂野”(Heuchera micrantha ‘Rave On’),“萊姆里奇”(Heuchera micrantha ‘Lime Rickey’),“黃桃派”(Heuchera micrantha ‘Peach Pie’)和“喬治亞桃子”(Heuchera micrantha ‘Georgia Peach’)四個(gè)品種栽種于安康學(xué)院江北校區(qū)溫室大棚內(nèi)，栽培基質(zhì)采用營養(yǎng)土∶黃泥土∶沙土=1∶1∶1,棚內(nèi)溫度控制在15 ℃～30 ℃之間，期間保持空氣濕度50%～80%，基質(zhì)含水量在50%左右。組培試驗(yàn)于2017年4月采集四個(gè)礬根莖段作為組培快繁的外植體材料。

  1.2 試驗(yàn)方法

  1.2.1 礬根初代培養(yǎng)誘導(dǎo)試驗(yàn)設(shè)計(jì)從日光溫室里種植的四種礬根植株上選取生長健康的莖段作為外植體。用流水沖洗干凈，將外植體轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)，用75%酒精清洗30 s，用無菌水清洗3次后備用。以MS為培養(yǎng)基，添加3種不同激素配方進(jìn)行培養(yǎng)，共12個(gè)處理。接種后置于已滅菌的培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)條件溫度在25±2 ℃之間，空氣相對濕度55%左右。

  1.2.2 礬根繼代培養(yǎng)試驗(yàn)設(shè)計(jì)選取初代很佳配方培養(yǎng)四種礬根莖段30 d后，以MS為基本培養(yǎng)基，添加3種不同配方的培養(yǎng)基對進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)處理接種30瓶，共12個(gè)處理，30 d后統(tǒng)計(jì)出芽個(gè)數(shù)計(jì)算其增殖系數(shù)，確定很佳繼代培養(yǎng)基的激素配方，培養(yǎng)條件同前。

  1.2.3 礬根生根培養(yǎng)基的篩選及煉苗方法選取出芽較好的礬根組培苗，接種于1/2 MS+IBA 1.5 mg·L-1+NAA 1 mg·L-1培養(yǎng)基上，培養(yǎng)條件同前。30 d后調(diào)查其株高，葉片數(shù)，發(fā)根數(shù)根長等指標(biāo)。

  移栽前，在組培室內(nèi)去掉培養(yǎng)瓶的蓋子3 d后，將組培苗從瓶內(nèi)取出，洗去根部的瓊脂培養(yǎng)基，將其移入泥炭和珍珠巖為1:1的基質(zhì)中，進(jìn)行移栽后的養(yǎng)護(hù)管理。

  1.3 統(tǒng)計(jì)方法

  采用隨機(jī)抽樣法，抽取3組，每組3瓶，統(tǒng)計(jì)計(jì)算每個(gè)品種的誘導(dǎo)率，增殖系數(shù)，生根率，葉片數(shù)，株高，根數(shù)和根長，其中誘導(dǎo)率、增殖系數(shù)和生根率指標(biāo)計(jì)算方法如下：

  誘導(dǎo)率=誘導(dǎo)成功的礬根莖段總數(shù)/接種的礬根莖段總數(shù)×100%

  增殖系數(shù)=組培苗在一個(gè)周期內(nèi)形成的有效芽數(shù)/接種塊數(shù)×100%(有效苗數(shù)為帶3～4片葉的小苗)

  生根率=生根的礬根總數(shù)/接種的總苗數(shù)×100%

  試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用EXCEL 2013和SPSS 19軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

  2 結(jié)果分析

  2.1 四種礬根初代培養(yǎng)誘導(dǎo)試驗(yàn)結(jié)果

  四種礬根材料取莖段以MS為培養(yǎng)基，添加3種不同激素濃度配方進(jìn)行培養(yǎng)。接種30 d后，統(tǒng)計(jì)其不同品種在不同激素配方條件下的愈傷組織誘導(dǎo)率，結(jié)果見表1。

  表1 不同激素配方對四種礬根初代培養(yǎng)誘導(dǎo)率的影響

  注：A品種名為“狂野”,B品種名為“萊姆里奇”,C品種名為“黃桃派”，D品種名為“喬治亞桃子”，下同。

  采用雙因素有重復(fù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)利用EXCEL進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對表1試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，四個(gè)品種在不同激素配方條件下的誘導(dǎo)率差異不顯著，而不同激素配方對四個(gè)品種的影響達(dá)到極顯著差異，兩因素互作差異不顯著。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果中6-BA0.5 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1的誘導(dǎo)效果很好，四個(gè)品種的平均誘導(dǎo)率達(dá)到84.05%，可作為誘導(dǎo)四個(gè)品種的愈傷組織誘導(dǎo)的很佳培養(yǎng)配方。誘導(dǎo)結(jié)果如圖1。

  2.2 四種礬根繼代培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果

  將初代培養(yǎng)獲得的愈傷組織轉(zhuǎn)入添加不同激素配方的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)30 d，對不同激素配方下的四種礬根品種的增殖系數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，確定繼代培養(yǎng)基適宜的激素配方，結(jié)果見表2。

  圖1 四個(gè)礬根品種愈傷組織誘導(dǎo)情況

  表2 不同激素配方對四種礬根繼代培養(yǎng)增殖系數(shù)的影響

  經(jīng)SPSS 19對品種與激素配方兩個(gè)因素有重復(fù)的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明：品種間差異存在顯著差異，其中B品種“萊姆里奇”增殖系數(shù)最高，平均可達(dá)3.48，A品種“狂野”次之，C品種“黃桃派”和D品種“喬治亞桃子”差異不顯著;不同激素配方間差異顯著，其中采用6-BA0.2 mg·L-1 +NAA0.05 mg·L-1的誘導(dǎo)率達(dá)4.2，效果很好，6-BA0.2 mg·L-1 +NAA0.01 mg·L-1，誘導(dǎo)效果最差，誘導(dǎo)效果見圖2。

  圖2 四個(gè)礬根品種繼代培養(yǎng)誘導(dǎo)率情況

  統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，品種與激素之間的互作差異顯著，進(jìn)一步分析兩因素的互作效應(yīng)，其中B品種萊姆里奇采用6-BA0.2 mg·L-1 +NAA 0.05 mg·L-1的誘導(dǎo)率最高，可達(dá)5.83，C品種“黃桃派”采用6-BA0.2 mg·L-1 +NAA0.01 mg·L-1的誘導(dǎo)效果最差，分析結(jié)果見圖3。

  
   圖3 繼代培養(yǎng)不同激素配方與礬根品種間增殖系數(shù)互作效應(yīng)結(jié)果

  2.3 四種礬根生根培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果

  將叢生芽發(fā)出較好的的四個(gè)品種切分為帶3-4片葉的芽簇，接入1/2 MS+IBA 1.5 mg·L-1+NAA 1 mg·L-1培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)30 d后四個(gè)不同品種生根情況見圖4。

  圖4 四個(gè)礬根品種組培生根誘導(dǎo)情況

  對四個(gè)品種的生根等生理指標(biāo)進(jìn)行調(diào)查統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表3。表3結(jié)果表明，四個(gè)品種在1/2 MS+IBA 1.5 mg·L-1+NAA 1 mg·L-1生根率、平均葉片數(shù)、平均發(fā)根數(shù)、株高、根長等有一定差異，其中品種B 萊姆里奇除根長外，其它指標(biāo)均為很佳，表明此品種采用1/2 MS+IBA 1.5 mg·L-1+NAA 1 mg·L-1效果很好。

  表3 四個(gè)礬根品種組培生根誘導(dǎo)情況

  3 討論

  3.1 不同激素配方對礬根愈傷組織誘導(dǎo)的影響

  以礬根帶莖尖幼嫩莖段為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基，研究了不同激素配比條件下礬根的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)。結(jié)果表明：適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5 mg·L-1+NAA0.05 mg·L-1。以柔毛礬根‘香茅’和‘飴糖’為試材，對其組培快繁技術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)研究。結(jié)果表明：以溫室采集的芽作為外植體較適宜;初代培養(yǎng)很佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA0.2 mg·L-1本實(shí)驗(yàn)與之不同的是NAA含量不同，因?yàn)樵囼?yàn)中預(yù)備試驗(yàn)中NAA達(dá)到0.2 mg·L-1時(shí)仍未誘導(dǎo)成功后將NAA含量調(diào)高至0.5 mg·L-1，6-BA和NAA為1:1的比例，試驗(yàn)結(jié)果顯示，礬根“狂野”、“萊姆里奇”、“黃桃派”和“喬治亞桃子”誘導(dǎo)率均為良好。

  3.2 不同激素配方對礬根增殖系數(shù)的影響

  以柔毛礬根‘香茅’和‘飴糖’為試材，其增殖系數(shù)最低可達(dá)6.2以上，與本試驗(yàn)差異較大，其原因?yàn)榻y(tǒng)計(jì)方法不同。由于礬根叢生芽多，試驗(yàn)按照每株3～4個(gè)芽為一株，故統(tǒng)計(jì)結(jié)果遠(yuǎn)小于王晶的試驗(yàn)結(jié)果，且本試驗(yàn)所采用的激素配方與其試驗(yàn)也有很大不同，原因可能與礬根不同品種和不同外植體有關(guān)，可以作更進(jìn)一步的探究。

  3.3 不同培養(yǎng)基對礬根生根誘導(dǎo)的影響

  王晶[4]等以柔毛礬根‘香茅’和‘飴糖’為試材，對其組培快繁技術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)研究，生根階段的很佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA1.5 mg·L-1。孟清秀為加快礬根的繁殖速度和質(zhì)量，更好的滿足生產(chǎn)需求，以‘瀑布’、‘飴糖’、‘紫色宮殿’3個(gè)礬根品種的莖尖為外植體，以MS培養(yǎng)基研究了不同激素配比條件下礬根的組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，‘瀑布’、‘飴糖’、‘紫色宮殿’的很佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.3 mg·L-1+AC1.0 g·L-1。本試驗(yàn)前期也試著用上述激素配方做預(yù)備試驗(yàn)，但結(jié)果均不理想。本次試驗(yàn)采用1/2 MS+IBA 1.5 mg·L-1+NAA 1 mg·L-1雖誘導(dǎo)出根，但未必為很佳培養(yǎng)方案，可在后繼做進(jìn)一步研究。

  4 結(jié)論

  研究針對四種礬根材料開展組培快繁技術(shù)研究，其結(jié)果為6-BA0.5 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1的誘導(dǎo)效果很好，四個(gè)品種的平均誘導(dǎo)率達(dá)到84.05%，可作為誘導(dǎo)四個(gè)品種的愈傷組織誘導(dǎo)的很佳培養(yǎng)配方;采用不同激素配方對四個(gè)品種增殖情況誘導(dǎo)結(jié)果表明：品種間差異存在顯著差異，其中B品種“萊姆里奇”增殖系數(shù)最高，平均可達(dá)3.48，不同激素配方間差異顯著，其中采用6-BA0.2 mg·L-1 +NAA0.05 mg·L-1的誘導(dǎo)率達(dá)4.2，效果很好，生根培養(yǎng)基配方為1/2 MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 1 mg·L-1四個(gè)品種平均誘導(dǎo)率可達(dá)74.13%。