近年來(lái)，采用組培快繁技術(shù)對(duì)多肉植物進(jìn)行繁殖的研究越來(lái)越多，并已在生產(chǎn)中獲得了廣泛的應(yīng)用。隨著這一繁殖技術(shù)的推廣與使用，生產(chǎn)者發(fā)現(xiàn)，通過(guò)組織培養(yǎng)繁殖的商品苗在外觀形態(tài)上與分株或播種繁殖苗存在明顯的差異，其中，組培苗基部葉片較長(zhǎng)，畸形，觀賞效果差，認(rèn)為對(duì)這些葉片去除后會(huì)導(dǎo)致植株整體形態(tài)不完整，從而失去觀賞價(jià)值。其原因主要是由于移栽出的組培苗形態(tài)與自然繁殖苗不同，組培苗一般葉片細(xì)長(zhǎng)，厚度不足，整體植株細(xì)弱，生長(zhǎng)勢(shì)不強(qiáng)，因此導(dǎo)致組培苗需要較長(zhǎng)時(shí)間的生長(zhǎng)，新生葉才能恢復(fù)其正常的品種特征，不僅影響了這些多肉植物的商品價(jià)值，也增加了培養(yǎng)時(shí)間、提高了生產(chǎn)成本，從而影響了這一技術(shù)的應(yīng)用前景。

  本研究以冰燈玉露再生苗為外植體，采用含有不同激素的培養(yǎng)基、不同的培養(yǎng)溫度及光照強(qiáng)度等方法，以找到適宜的促成其組培苗正常形態(tài)建成的培養(yǎng)條件，試驗(yàn)結(jié)果可以減少組培快繁中冰燈玉露畸形苗的產(chǎn)生，縮短冰燈玉露組培苗移栽成苗的時(shí)間，可為研究其他多肉植物的組培快繁技術(shù)及其應(yīng)用提供一定的參考。

  1 材料和方法

  1.1 植物材料

  供試冰燈玉露再生苗為天津農(nóng)學(xué)院園林植物實(shí)驗(yàn)室提供。

  1.2 試驗(yàn)方法

  1.2.1 不同激素對(duì)冰燈玉露形態(tài)建成的影響

  經(jīng)過(guò)增殖培養(yǎng)獲得的冰燈玉露組培苗在移栽前形態(tài)與自然生長(zhǎng)苗存在較大差異。為了在移栽前對(duì)組培苗形態(tài)重建，將組培苗轉(zhuǎn)移到含有不同激素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以獲得生長(zhǎng)外形與自然狀態(tài)下一致的幼苗。試驗(yàn)采用100 mL三角瓶，每瓶加入40 mL培養(yǎng)基。每個(gè)處理做10瓶，每瓶接種5個(gè)再生苗。接種后將三角瓶放入組培室，培養(yǎng)條件為：25℃，24 h連續(xù)光照，光照強(qiáng)度2 000 lx。接種后每天觀察再生苗的生長(zhǎng)情況，經(jīng)過(guò)約40 d培養(yǎng)，記錄再生苗在不同培養(yǎng)基上的形態(tài)變化情況。

  1.2.2 不同溫度對(duì)冰燈玉露形態(tài)建成的影響

  為了進(jìn)一步研究冰燈玉露組培苗形態(tài)建成中溫度的影響，采用不同溫度(20，22，24，26，28℃)條件，對(duì)再生苗的生長(zhǎng)變化進(jìn)行試驗(yàn)。采用1.2.1篩選出的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)與1.2.1相同。接種后每天觀察再生苗的生長(zhǎng)情況，經(jīng)過(guò)約30 d培養(yǎng)，記錄再生苗在不同溫度下的形態(tài)變化情況。

  1.2.3 不同光照強(qiáng)度對(duì)冰燈玉露形態(tài)建成的影響為了研究光照對(duì)冰燈玉露形態(tài)建成的影響，采用冰燈玉露組培苗，接種到1.2.2所用的培養(yǎng)基上。采用25℃，24 h連續(xù)光照，只是光照強(qiáng)度(1 500，2 000，2 500，3 000，4 000 lx)不同。接種后每天觀察再生苗的生長(zhǎng)情況，經(jīng)過(guò)約40 d培養(yǎng)，記錄再生苗在不同光照強(qiáng)度下的形態(tài)變化情況。

  2 結(jié)果與分析

  2.1 不同激素對(duì)冰燈玉露形態(tài)建成的影響

  從表1可以看出，冰燈玉露組培苗在MS上生長(zhǎng)基本都是形態(tài)不正常苗，這種苗葉片較自然條件下生長(zhǎng)的要細(xì)，而且形狀與自然狀態(tài)下的苗不同，葉子分布不規(guī)則，葉子上端看不到“窗”的構(gòu)造。說(shuō)明一般不經(jīng)過(guò)形態(tài)重建誘導(dǎo)，冰燈玉露組培苗移栽后很難在短時(shí)間內(nèi)長(zhǎng)成自然狀態(tài)，使其具有一定的觀賞性。在培養(yǎng)基中附加一定量的IAA，情況并沒(méi)有好轉(zhuǎn)，而且組培苗出現(xiàn)了肉質(zhì)根，這類根形成后，植株生長(zhǎng)緩慢，有的還出現(xiàn)褐變死亡現(xiàn)象。說(shuō)明生長(zhǎng)素不利于冰燈玉露組培苗的形態(tài)重建。當(dāng)在培養(yǎng)基中添加BA后，情況有所改進(jìn)，組培苗生長(zhǎng)加快，同時(shí)葉片形態(tài)出現(xiàn)變化，葉片變厚，排列整齊，從外觀上基本與自然條件下相似;在不同BA濃度下，組培苗生長(zhǎng)情況不同，效果好的是0.25 mg·L-1BA，當(dāng)BA質(zhì)量濃度達(dá)到1.0 mg·L-1時(shí)，符合要求的組培苗數(shù)量減少，同時(shí)植株生長(zhǎng)緩慢，植株變得矮小。因此，在適宜的BA濃度下，冰燈玉露的組培苗才能實(shí)現(xiàn)形態(tài)重建。本試驗(yàn)還嘗試了同時(shí)加入BA與IAA，但效果與MS相同，沒(méi)有出現(xiàn)形態(tài)正常的組培苗。說(shuō)明在MS培養(yǎng)基中添加0.25 mg·L-1的BA可以獲得部分植株形態(tài)與自然生長(zhǎng)相似的組培苗。

  表1 不同激素對(duì)冰燈玉露形態(tài)建成的影響

  2.2 不同溫度對(duì)冰燈玉露形態(tài)建成的影響

  從表2可以看出，冰燈玉露形態(tài)正常率較高，原因主要是由于試驗(yàn)采用的培養(yǎng)基為MS附加0.25 mg·L-1的BA，因此，組培苗形態(tài)普遍變得較為正常;但在不同溫度下，形態(tài)正常苗的比例有所不同，當(dāng)溫度為20℃時(shí)，獲得的形態(tài)正常的組培苗數(shù)多，而隨著溫度的增加，組培苗恢復(fù)率也逐漸下降，到28℃時(shí)，僅有38%。說(shuō)明冰燈玉露形態(tài)建成培養(yǎng)的溫度應(yīng)采用較低的溫度。在試驗(yàn)中，也曾采用18℃進(jìn)行培養(yǎng)，但結(jié)果顯示，幾乎所有組培苗都停止生長(zhǎng)，只有個(gè)別生長(zhǎng)正常，說(shuō)明過(guò)低溫度也不利于冰燈玉露組培苗的形態(tài)建成。雖然在20℃時(shí)可以獲得較高的冰燈玉露組培苗的恢復(fù)率，但也因溫度較低，組培苗生長(zhǎng)速度較慢，也不是理想的培養(yǎng)條件。為此，試驗(yàn)又采用不同光照強(qiáng)度來(lái)提高形態(tài)重建率，希望獲得較高、較快的冰燈玉露形態(tài)重建培養(yǎng)。

  表2 不同溫度對(duì)冰燈玉露形態(tài)建成的影響

  2.3 不同光照強(qiáng)度對(duì)冰燈玉露形態(tài)建成的影響

  試驗(yàn)采用 1 500，2 000，2 500，3 000，4 000 lx的光照強(qiáng)度，對(duì)冰燈玉露新增殖的小苗進(jìn)行24 h連續(xù)光照培養(yǎng)，同時(shí)采用附加0.25 mg·L-1BA的培養(yǎng)基和20℃的培養(yǎng)溫度。

  從表3可以看出，在不同光照強(qiáng)度條件下，冰燈玉露組培苗在生長(zhǎng)速度與形態(tài)上出現(xiàn)較大變化，畸形苗恢復(fù)率明顯提高，生長(zhǎng)速度也有所加快，說(shuō)明光照強(qiáng)度對(duì)于組培苗生長(zhǎng)速度與形態(tài)建成有較大影響。從形態(tài)恢復(fù)率來(lái)看，在光照強(qiáng)度為3 000 lx時(shí)效果好，同時(shí)組培苗的生長(zhǎng)速度也較快。因此，選擇光照強(qiáng)度為3 000 lx，溫度為20℃，在含有0.25 mg·L-1BA的培養(yǎng)基上，冰燈玉露組培苗可以正常生長(zhǎng)，獲得的組培苗在移栽前就能達(dá)到自然狀態(tài)下的正常形態(tài)。

  表3 不同光照強(qiáng)度對(duì)冰燈玉露形態(tài)建成的影響

  3 結(jié)論與討論

  在本試驗(yàn)中，冰燈玉露組培苗在移栽前的形態(tài)與自然條件下的形態(tài)不一致的情況，在許多植物培養(yǎng)中普遍存在，其中原因很多，大致可以概括為幾個(gè)方面。第一，組培條件下生長(zhǎng)環(huán)境與自然環(huán)境之間的差異，導(dǎo)致一些性狀不能很好地表達(dá)。如在強(qiáng)光照下，才能出現(xiàn)的一些性狀，在組培條件下很難達(dá)到，因?yàn)榻M培苗在一個(gè)密閉的空間內(nèi)，過(guò)強(qiáng)的光照會(huì)導(dǎo)致其生存空間內(nèi)的溫度過(guò)高，從而影響組培苗的生長(zhǎng)。本試驗(yàn)中僅采用光照3 000 lx的強(qiáng)度，其是自然光照下強(qiáng)度的1/11，因此，環(huán)境是造成組培苗畸形的主要因素。當(dāng)組培苗移栽到自然環(huán)境下時(shí)，很快又能恢復(fù)其自然生長(zhǎng)的特性。第二，組培苗處于人為干擾下的生存方式，如光合作用不能夠很好建立，因?yàn)樵谂囵B(yǎng)基中添加了蔗糖作為能源物質(zhì)。在培養(yǎng)基中附加激素來(lái)引導(dǎo)其生長(zhǎng)分化，與自然條件下其自身自我調(diào)節(jié)的結(jié)果不同，被動(dòng)地生長(zhǎng)必將改變其特有的表現(xiàn)型。本試驗(yàn)也是通過(guò)改變培養(yǎng)基中的激素，從而達(dá)到冰燈玉露的形態(tài)重建。第三，組培生長(zhǎng)是一種與正常生長(zhǎng)不同的過(guò)程，正常生長(zhǎng)植物從種子到發(fā)芽，再到開(kāi)花、結(jié)果，是按照自然規(guī)律進(jìn)行的，而組培生長(zhǎng)一般是從某個(gè)階段直接進(jìn)行或者是從后向前進(jìn)行。如從某種成熟組織誘導(dǎo)再生，就是一種逆向生長(zhǎng)，形態(tài)出現(xiàn)畸形是很正常的。因此，要想在組培階段獲得形態(tài)與自然條件下的一致就要有一個(gè)形態(tài)重建的過(guò)程，再次通過(guò)人為干預(yù)達(dá)到與自然相近的生長(zhǎng)形態(tài)。

  本試驗(yàn)研究了激素、光照和溫度對(duì)冰燈玉露組培苗生長(zhǎng)形態(tài)的影響，獲得生長(zhǎng)正常、與自然條件下形態(tài)相似的組培苗培養(yǎng)體系，結(jié)果表明，將新增殖的冰燈玉露較小的組培苗選擇光照強(qiáng)度為3 000 lx，連續(xù)光照24 h，并在溫度為20℃以及在含有0.25 mg·L-1BA的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，可以獲得正常生長(zhǎng)的冰燈玉露組培苗，且獲得的組培苗在移栽前就能達(dá)到自然狀態(tài)下的正常形態(tài)。