葉下珠組培快繁體系研究

文章作者：騰昊科技發(fā)布時(shí)間：2021-09-06 10:57:40 瀏覽次數(shù)：1711次

本研究通過組織培養(yǎng)，對葉下珠進(jìn)行芽的誘導(dǎo)、增殖、生根和煉苗移栽等，建立了一套完整的葉下珠組培快繁體系，為葉下珠大規(guī)模繁殖提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

福建省廈門市福建省亞熱帶植物研究所內(nèi)種植的葉下珠Phyllanthus urinaria。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)條件基本培養(yǎng)基為 MS，瓊脂 7.5 g·L-1，蔗糖為 30 g·L-1，pH 5.8～6.0。培養(yǎng)溫度(25 ± 1) ℃，光照時(shí)間12 h·d -1，光照強(qiáng)度1000～1500 lx。

1.2.2 外植體接種選取長勢均勻的葉下珠植株，用剪刀剪取位于植株中部的莖段，去除葉片與假葉柄。加1～2滴洗潔精將莖段表面洗刷干凈，流水沖洗5～6 h。于超凈工作臺(tái)上用75%酒精浸泡30 s，然后用0.1%升汞消毒13 min，無菌水沖洗5～6次，并用無菌濾紙擦干，置于接種盤上。用手術(shù)刀將外植體切成1.5～2 cm帶節(jié)莖段，生物學(xué)頂端朝上接種于培養(yǎng)基上。

1.2.3 生長調(diào)節(jié)劑配比試驗(yàn) 將消毒外植體接種到按單因素多水平設(shè)計(jì)的不同生長調(diào)節(jié)劑配比的、添加0.5 g·L-1活性炭的MS培養(yǎng)基中，共計(jì)7組，分別為：IBA為0.2 mg·L-1，6-BA分別為1.0、1.5、2.0、3.0 mg·L-1;6-BA 為 1.5 mg·L-1，IBA 分別為 0.1、0.2、0.5、1.0 mg·L-1 (表 1)。每組 15 瓶，每瓶接 1個(gè)外植體，每3 d觀察1次，15 d統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)情況。

1.2.4 誘導(dǎo)培養(yǎng)基得出芽誘導(dǎo)佳生長調(diào)節(jié)劑配方后，對比添加0.5 g·L-1活性炭的MS和1/2MS培養(yǎng)基的誘導(dǎo)效果，共2組，每組24瓶，每瓶接1個(gè)外植體，每4 d觀察1次，20 d后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)情況。

1.2.5 不同濃度6-BA對葉下珠芽的處理將莖段誘導(dǎo)出的芽在超凈工作臺(tái)上切成1.5～2 cm帶芽莖段，接種至添加不同濃度6-BA的培養(yǎng)基中，共計(jì)3組，每處理5瓶，每瓶2個(gè)，即每處理10個(gè)外植體，每5 d觀察1次，25 d后統(tǒng)計(jì)芽增殖情況。

1.2.6 不同濃度NAA與IBA對叢生芽的處理將增殖擴(kuò)繁的叢生芽在超凈工作臺(tái)上分成單個(gè)芽，接種至添加蔗糖20 g·L-1的不同培養(yǎng)基中，共計(jì)6組，每處理5瓶，每瓶10個(gè)芽，即每處理50個(gè)芽，每5 d觀察1次，25 d后統(tǒng)計(jì)生根、長勢情況。

1.2.7 煉苗將生根的瓶苗轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)室外進(jìn)行煉苗，處理時(shí)間設(shè)置見表5。煉苗后清水洗凈根部培養(yǎng)基，移栽至加水拌成泥狀的菜園土基質(zhì)。栽培條件：自然光，氣溫25～30 ℃。移栽15 d后統(tǒng)計(jì)成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生長調(diào)節(jié)劑配比對葉下珠芽誘導(dǎo)的影響

從表1可知，不同濃度生長調(diào)節(jié)劑配比對葉下珠莖段誘導(dǎo)芽的影響效果不同。當(dāng)IBA為0.2 mg·L-1時(shí)，誘導(dǎo)率先是隨6-BA濃度升高而升高，當(dāng)6-BA濃度達(dá)2.0 mg·L-1后，呈現(xiàn)出隨6-BA濃度升高而降低的趨勢。當(dāng)6-BA為1.5 mg·L-1時(shí)，誘導(dǎo)率隨IBA濃度升高呈降低的趨勢。當(dāng)6-BA為2.0 mg·L-1，IBA 為 0.2 mg·L-1時(shí)，誘導(dǎo)率高，達(dá)到81.82%，芽的平均長度長，達(dá)到1.00 cm，故該配比可作為適宜的葉下珠莖節(jié)誘導(dǎo)芽生長調(diào)節(jié)劑配比。

表1 生長調(diào)節(jié)劑對葉下珠芽誘導(dǎo)的影響

2.2 不同培養(yǎng)基對葉下珠芽誘導(dǎo)的影響

從表2可知，當(dāng)生長調(diào)節(jié)劑配方同為6-BA 2.0 mg·L-1，IBA 0.2 mg·L-1時(shí)，1/2MS 培養(yǎng)基比MS培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率高，達(dá)100%，平均芽長也較長，達(dá)2.46 cm。因此，較適合葉下珠莖段誘導(dǎo)芽的培養(yǎng)基配方為 1/2MS +6-BA 2.0 mg·L-1 + IBA 0.2 mg·L-1 + 瓊脂7.5 g·L-1 + 蔗糖 30 g·L-1 + 活性炭 0.5 g·L-1。

表2 不同培養(yǎng)基對葉下珠莖段誘芽的影響

2.3 不同濃度6-BA對葉下珠芽增殖的影響

從表3可知，在相同IBA濃度下，6-BA濃度為1.0 mg·L-1時(shí)，芽平均增殖倍數(shù)達(dá)3.8，為本試驗(yàn)大增殖倍數(shù)，小芽長勢也較好，可為后期研究提供良好的材料。因此，在本試驗(yàn)中適合芽增殖的培養(yǎng)基配方為 1/2MS + 6-BA 1.0 mg·L-1+ IBA 0.2 mg·L-1 + 瓊脂7.5 g·L-1 + 蔗糖 30 g·L-1。

表3 不同濃度6-BA對葉下珠芽增殖的影響

注：基本培養(yǎng)基為1/2MS。

2.4 不同濃度NAA與IBA對叢生芽生根的影響

從表4可知，NAA對葉下珠叢生芽生長、生根作用不佳。添加NAA后，植株瘦小，莖下部長滿紅色愈傷組織，根呈白色絨毛狀。IBA對葉下珠叢生芽生長、生根有明顯促進(jìn)作用，在IBA為0.5 mg·L-1時(shí)，叢生芽生長快，植株綠色，較粗壯、健康，根系發(fā)達(dá)，主次根明顯(圖1)。但隨IBA濃度增加，叢生芽植株生長變緩，主次根區(qū)別不明顯。因此，較適合叢生芽生根的培養(yǎng)基為1/2MS + IBA 0.5 mg·L-1+ 瓊脂7.5 g·L-1 + 蔗糖20 g·L-1，此時(shí)叢生芽生長快，根系發(fā)達(dá)，生根率達(dá)100.00%。

表4 不同濃度NAA與IBA對葉下珠叢生芽生根的影響

注：基本培養(yǎng)基為1/2MS;“-”表示差，“+”表示一般，“++”表示好，“+++”表示較好，“++++”表示好。

圖1 添加IBA 0.5 mg·L-1的誘導(dǎo)苗長勢及生根(25 d)

2.5 不同煉苗時(shí)間對葉下珠瓶苗移栽的影響

從表5可見，不經(jīng)煉苗直接移栽，成活率為60.00%，經(jīng)過適當(dāng)煉苗可提高移栽的成活率;煉苗時(shí)間不宜太長，若開蓋太長，瓶苗內(nèi)的培養(yǎng)基長菌，對瓶苗造成傷害;若整體煉苗時(shí)間太長，瓶苗自身易失水，不利于移栽，導(dǎo)致成活率低。因此，較適合葉下珠組培苗的煉苗方式為室外閉蓋煉苗 2 d，開蓋煉苗3 d，移栽成活率達(dá)86.67%。

表5 不同煉苗時(shí)間對移栽成活率的影響

3 討論

葉下珠的主要藥理活性成分柯里拉京是一種多酚類物質(zhì)，極容易氧化。在外植體誘導(dǎo)叢生芽的過程中，莖節(jié)的切口會(huì)分泌大量次生代謝產(chǎn)物，導(dǎo)致外植體褐化，降低組培成功率。外植體褐化程度高，需通過多次轉(zhuǎn)接以避免褐化，但是多次轉(zhuǎn)接易造成污染。本試驗(yàn)通過添加活性炭以吸收次生代謝物，抑制褐化效果良好，也減少人為操作帶來的污染。

在芽增殖試驗(yàn)中，1.0 mg·L-1 6-BA 和0.2 mg·L-1 IBA的生長調(diào)節(jié)劑組合是較適合芽增殖的生長調(diào)節(jié)劑配比，這與研究結(jié)果相近，但他們認(rèn)為芽增殖中6-BA佳濃度為2.0 mg·L-1。本研究中6-BA濃度為1.0、1.5、2.0 mg·L-1的芽增殖系數(shù)均達(dá)3倍以上，并以1.0 mg·L-1時(shí)增殖倍數(shù)大，小芽長勢好。

在煉苗移栽研究中，基質(zhì)為泥狀菜園土。泥狀土在栽培初期水分飽滿，但后期易結(jié)塊，對組培苗成活率造成一定影響。可適當(dāng)添加一定比例的有機(jī)土進(jìn)行改良，調(diào)整土壤疏松度，以利于移栽苗成活?！颈疚恼聝?nèi)容來源于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請告知！我們立即刪除】

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