組培工廠應(yīng)選址在安靜、潔凈、可避開各種污染環(huán)境的地方,才能減少操作污染,降低生產(chǎn)成本,確保工作的順利進(jìn)行。根據(jù)已確定的生產(chǎn)規(guī)模,設(shè)計組培生產(chǎn)車間時,要全面了解工作中需要哪些基本的設(shè)備條件,以便因地制宜利用現(xiàn)有房屋改建或新建組培工廠,盡量做到合理布局。通常按組培生產(chǎn)程序先后,順次安排成一條連續(xù)的生產(chǎn)線,主要包括培養(yǎng)器皿清洗;培養(yǎng)基的配置、分裝、包扎和高壓滅菌;無菌操作材料的表面滅菌和接種;進(jìn)入培養(yǎng)室培養(yǎng);試管苗的種植和前期管理等。較為理想的平面布置見文章后面的圖3-1,3-2。
一、清洗室
要求具有耐酸堿的水池和排水口。每天都有大量的植物材料碎片、瓊脂等東西堆積,因此排水口一定要安裝過濾網(wǎng),做到每天清洗檢查,一是減少微生物滋生源,二是避免排水系統(tǒng)堵塞,帶來不必要的麻煩。
配有不同形狀及大小的洗滌刷,如果有可能安裝洗瓶機(jī)器,更能提高工作效率。 配備數(shù)個塑料箱盛裝瓶子,將瓶放入箱內(nèi)時,應(yīng)倒立,這樣可使瓶子自然干燥。
二、培養(yǎng)基配制及滅菌室
手提式高壓滅菌鍋2~3個,用于一些小型物品或急需用品的高壓滅菌。
組培工廠必須配備1至數(shù)臺大型滅菌鍋,直徑40~50cm的不銹鋼或鋁鍋2~3個,用于溶解瓊脂或調(diào)制培養(yǎng)基,加熱源好采用煤氣灶或用電。
去離子水發(fā)生器1~2臺。
干燥箱1臺,用于器皿或急需用具的干熱滅菌。
大型工作臺1~2張,用于培養(yǎng)基分裝、包扎等。
玻璃柜1個,用于放置藥品等。
試劑瓶、具刻度移液管、皮下注射器、量筒、搪瓷量杯、容量瓶、各式塑料瓶或塑料桶等易損品數(shù)個,更重要的是配備大量充足的培養(yǎng)瓶。
三、檢測及稱量室
PCR儀:可用于真菌和細(xì)菌性病原菌的檢測和部分病毒病的檢測。
酶標(biāo)儀:通過血清免疫技術(shù)(ELISA)進(jìn)行主要病毒病的檢測。
雙目顯微鏡、解剖鏡:用于植物組織培養(yǎng)材料的形態(tài)發(fā)育及細(xì)胞觀察。
凹穴載玻片:用于細(xì)胞懸浮培養(yǎng)。
載玻片和蓋玻片:用于制作細(xì)胞和組織的顯微制片。
光照培養(yǎng)箱;用于不同種類植物培養(yǎng)方法或培養(yǎng)條件的研究。
冰箱:用于貯存化學(xué)藥品,培養(yǎng)基母液和植物材料等。
低溫冰箱:用于長期貯存培養(yǎng)基儲備液,某些酶和椰子汁等。
稱量儀器:包括感量為1/10000的電子天平,感量為1/10的普通托盤天平,稱量為1~5kg的臺秤等,用于藥品的稱量配制和植物組織生長量的測定。
水質(zhì)及培養(yǎng)基檢測儀器:包括pH酸度計、電導(dǎo)率儀或Ec值測定儀。
細(xì)菌濾膜及其支座:用于對溶液進(jìn)行過濾滅菌。
四、無菌操作室(接種室)
這是組培工廠的核心和關(guān)鍵部分,是進(jìn)行無菌操作的場所,如植物材料的消毒接種,無菌材料的繼代,叢生苗的增殖或切割,嫩莖插植生根等。它也關(guān)系到污染率這項重要的成本指標(biāo)的高低,直接影響組培工廠的工作效率及經(jīng)濟(jì)效益。無菌操作室原則上宜小不宜大,要有緩沖間,以便進(jìn)人無菌室前在此洗手、換衣、換鞋、預(yù)處理材料等。無菌室的地板和四周墻壁應(yīng)盡可能光潔,不易積染灰塵,易于采取各種清潔和消毒措施。無菌室內(nèi)要吊裝紫外滅菌燈,用于經(jīng)常照射滅菌。要安裝空調(diào)機(jī),保持室溫在23~25℃,原則上無菌室的門窗應(yīng)緊閉,保持與外界相對隔絕。無菌操作室內(nèi)需要的用具如下。
超凈工作臺:用于進(jìn)行無菌操作。
室內(nèi)小推車:用于運(yùn)送培養(yǎng)物、培養(yǎng)基和各種器皿用具。
酒精燈:用于灼燒各種金屬用具。
手持噴霧器:用于在超凈工作臺內(nèi)或?qū)ζ渌锲穱姙⒕凭M(jìn)行消毒。
帶蓋螺口玻璃瓶:用于盛裝無菌水,對植物材料進(jìn)行表面消毒。
大的鈍頭鑷子:用于進(jìn)行接種和繼代、生根等操作。
細(xì)解剖針;用于植物材料的解剖。
解剖刀:用于切割植物材料。
各種孔徑的不銹鋼篩網(wǎng):用于分離太小不同的細(xì)胞團(tuán)。
低速臺式離心機(jī):用于沉淀細(xì)胞,以便確定沉積細(xì)胞的總體積或清洗原生質(zhì)體。
振蕩培養(yǎng)器;用于植物材料的液體培養(yǎng)。
血球計算器;用于細(xì)胞計數(shù)。
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