組培設(shè)備根據(jù)植物對這些元素要量的不同或者根據(jù)目前植物培養(yǎng)基中添加的這些元素量的大小,可將它們分成大量元素和微量元素。大量元素一般指在培養(yǎng)基中的濃度大于0.5mmol/L的元素,微量元素指小于0.5mmol/L的元素...
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1、組培設(shè)備大量元素
組培設(shè)備主要包括氮、磷、鉀、鈣、鎂和硫六種。其中,氮常以硝態(tài)氮(NO 3- )或氨態(tài)氮(NH 4+ ),或兩者相互配合的形式存在。缺氮時某些植物的愈傷組織會出現(xiàn)一種很引人注目的花色素苷的顏色,愈傷組織內(nèi)部不能形成導管。鎂常MgSO 4 ?7H 2 O的形式,既提供了鎂也提供了硫。硫還有用Na2SO4的形式提供,不過其中的鈉(Na)對植物并不是必需的,或者說常常是不利的。磷常以NaH 2 PO 4 ?H 2 O,KH 2 PO 4 或(NH 4 )H 2 PO 4 的形式提供。鉀常以KCl、KNO 3 或KH 2 PO 4 形式。鈣常以CaCl 2 ?2H 2 O、Ca(NO 3 ) 2 ?4H 2 O或其無水形式提供。缺硫時培養(yǎng)的植物組織會明顯的退綠;缺磷或鉀時細胞會過度生長,愈傷組織表現(xiàn)出極其蓬松狀態(tài)。
(1)N 是蛋白質(zhì)、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿等的組成成分,是生命不可缺少的物質(zhì)。在制備培養(yǎng)基時以硝態(tài)氮(NO 3- )或氨態(tài)氮(NH 4+ )兩種形式供應。大多數(shù)培養(yǎng)基既含有硝態(tài)氮(NO 3- )又含有氨態(tài)氮(NH 4+ )。氨態(tài)氮(NH 4+ )對植物生長較為有利。供應的物質(zhì)有KNO 3 、NH 4 NO 3 等。有時,也添加氨基酸來補充氮素。
(2)P 是磷脂的主要成分。而磷脂又是原生質(zhì)、細胞核的重要組成部分。磷也是ATP、ADP等的組成成分。在植物組織培養(yǎng)過程中,向培養(yǎng)基內(nèi)添加磷,不僅增加養(yǎng)分、提供能量,而且也促進對N的吸收,增加蛋白質(zhì)在植物體中的積累。常用的物質(zhì)有KH 2 PO 4 或NaH 2 PO 4 等。
(3)K 對碳水化合物合成、轉(zhuǎn)移、以及氮素代謝等有密切關(guān)系。K增加時,蛋白質(zhì)合成增加,維管束、纖維組織發(fā)達,對胚的分化有促進作用。但濃度不易過大,一般為1-3mg/L為好。制備培養(yǎng)基時,常以KCl、KNO3等鹽類提供。
(4)Mg、S和Ca、Mg 是葉綠素的組成成分,又是激酶的活化劑;S是含S氨基酸和蛋白質(zhì)的組成成分。它們常以MgSO 4 .7H 2 O提供。用量為1-3mg/L較為適宜;Ca是構(gòu)成細胞壁的一種成分,Ca對細胞分裂、保護質(zhì)膜不受破壞有顯著作用,常以CaCl 2 .2H 2 9提供。
2、組培設(shè)備微量元素
組培設(shè)備培養(yǎng)基的微量元素主要包括鐵(Fe)、錳(Mn)、銅(Cu)、鋅(Zn)、氯(Cl)、硼(B)和鉬(Mo)等。這些元素有的對生命活動的某個過程十分有用,有的對蛋白質(zhì)或酶的生物活性十分重要,有的是參與某些生物過程的調(diào)節(jié)。Fe有兩個重要功能,作為酶的重要組成成分和合成葉綠素所必需,缺鐵時細胞分裂停止。Mn對糖酵解中的某些酶有活化作用,是三羧酸循環(huán)中某些酶和硝酸還原酶的活化劑。B能促進糖的過膜運輸,影響植物的有性生殖如花器官的發(fā)育和受精作用。B還具有抑制有毒的酚類化合物的形成的作用,改善某些植物組織的培養(yǎng)狀況,缺硼時細胞分裂停滯,愈傷表現(xiàn)出老化現(xiàn)象。Zn是吲哚乙酸生物合成必需的,也是谷氨酸脫氫酶、乙醇脫氫酶等的活化劑。Cu是細胞色素氧化酶、多酚氧化酶等氧化酶的成分,可影響氧化還原過程。Mo是硝酸還原酶和鉬鐵蛋白的金屬成分。Cl在光合作用的水光解過程中起活化劑的作用,促進氧的釋放和還原NADP(輔酶II)。為了某些植物組織培養(yǎng)的特殊需要有人還把鈉(Na)、鎳(Ni)、鈷(Co)、碘(I)等也加入微量元素的行列。Na對某些鹽生植物、C4植物和景天酸代謝植物是必需的。Ni對尿酸酶(urease)的結(jié)構(gòu)和功能是必需的。但是有些成分的作用至今還不十分清楚,可人們?nèi)匀话阉鼈兗尤肱囵B(yǎng)基中,如碘(I)和鈷(Co)等。鐵是一些氧化酶、細胞色素氧化酶、過氧化氫酶等的組成成分。同時,它又是葉綠素形成的必要條件。培養(yǎng)基中的鐵對胚的形成、芽的分化和幼苗轉(zhuǎn)綠有促進作用。鐵作為一種微量元素,對植物也是必需的,但由于Fe的特殊性質(zhì),即很不穩(wěn)定、易沉淀,需要在酸性條件下才能比較穩(wěn)定,故在培養(yǎng)基配制時常常把Fe鹽單獨配制,且常以螯合物的形式,把FeSO 4 和它的螯合劑乙二胺四乙酸鈉(Na 2 EDTA)先分別配成溶液,再相互混合使形成螯合鐵,以防沉淀和幫助被植物吸收。但EDTA可能對某些酶系統(tǒng)和培養(yǎng)物的形成發(fā)生有一定的作用,使用時應慎重。
為了使用方便,無論是大量元素還是微量元素都常常是先配制成母液(即比實際培養(yǎng)基中的使用濃度高的儲存液),儲存在4度冰箱內(nèi)或在室溫下短期存放。
總之,組培設(shè)備植物必需營養(yǎng)元素可組成結(jié)構(gòu)物質(zhì),也可是具有生理活性的物質(zhì),如酶、輔酶以及作為酶的活化劑,參與活躍的新陳代謝。此外,在維持離子濃度平衡、膠體穩(wěn)定、電荷平衡等電化學方面起著重要作用。當某些營養(yǎng)元素供應不足時,愈傷組織表現(xiàn)出一定的缺素癥狀。如缺氮,會表現(xiàn)出一種花色素苷的顏色,不能形成導管;缺鐵,細胞停止分裂;缺硫,表現(xiàn)出非常明顯的褪綠;卻錳或鉬,則影響細胞的伸長。