組織培養(yǎng)的接種

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接種時由于有一個敞口的過程，所以是極易引起污染的時期，這一時期主要由空氣中的細菌和工作人員本身引起，接種室要嚴格進行空間消毒。接種室內保持定期用1%～3%的高錳酸鉀溶液對設備、墻壁、地板等進行搽洗。除了使用前用紫外線和甲醛滅菌外...

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組織培養(yǎng)

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詳細介紹

接種時由于有一個敞口的過程，所以是極易引起污染的時期，這一時期主要由空氣中的細菌和工作人員本身引起，接種室要嚴格進行空間消毒。接種室內保持定期用1%～3%的高錳酸鉀溶液對設備、墻壁、地板等進行搽洗。除了使用前用紫外線和甲醛滅菌外，還可在使用期間用70%的酒精或3%的來蘇兒噴霧，使空氣中灰塵顆粒沉降下來。

無菌操作的步驟

1.在接種4小時前用甲醛熏蒸接種室，并打開其內紫外線燈進行殺菌;

2.在接種前20分鐘，打開超凈工作臺的風機以及臺上的紫外線燈;

3.接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實驗服，并換穿拖鞋等;

4.上工作臺后，用酒精棉球搽拭雙手，特別是指甲處。然后搽拭工作臺面;

5.先用酒精棉球搽拭接種工具，再將鑷子和剪刀從頭至尾過火一遍，然后反復過火尖端處，對培養(yǎng)皿要過火烤干;

6.接種時，接種員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動和咳嗽等;

7.接種完畢后要清理干凈工作臺，可用紫外線燈滅菌30分鐘，若連續(xù)接種，每5天要大強度滅菌一次。

接種是將已消毒好的根、莖、葉等離體器官，經切割或剪裁成小段或小塊，放入培養(yǎng)基的過程。

無菌接種步驟

1.將初步洗滌及切割的材料放入燒杯，帶入超凈臺上，用消毒劑滅菌，再用無菌水沖洗，最后瀝去水分，取出放置在滅過菌的紗布上或濾紙上。

2.材料吸干后，一手拿鑷子、一手拿剪刀或解剖刀，對材料進行適當的切割。如葉片切成0.5cm平方的小塊;莖切成含有一個節(jié)的小段。微莖尖要剝成只含1～2片幼葉的莖尖大小等。在接種過程中要經常灼燒接種器械，防止交叉污染。

3.用灼燒消毒過的器械將切割好的外植體插植或放置到培養(yǎng)基上。具體操作過程(以試管為例)是：先解開包口紙，將試管幾乎水平拿著，使試管口靠近酒精燈火焰，并將管口在火焰上方轉動，使管口里外灼燒數秒鐘。若用棉塞蓋口，可先在管口外面灼燒，去掉棉塞，再燒管口里面。然后用鑷子夾取一塊切好的外植體送入試管內，輕輕插入培養(yǎng)基上。若是葉片直接附在培養(yǎng)基上，以放1～3塊為宜。至于材料放置方法除莖尖、莖段要正放(尖端向上)外，其他尚無統(tǒng)一要求。接種完后，將管口在火焰上再灼燒數秒種。并用棉塞，塞好后，包上包口紙，包口紙里面也要過火。

褐化

解決方案：在培養(yǎng)基中添加活性碳可以防止植物組織自身的酚類物質排泌和變褐老化，對形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好作用。一般認為，活性碳主要吸附非極性物質及色素大分子，可以減少一些有害物質的影響，但是具體吸附的選擇性很差，溫度低時吸附力增強，溫度高時吸附力減弱，甚至會解吸附，通常使用濃度為0.5-10g/L。加入活性炭后使培養(yǎng)基變黑，對一些植物誘導生根有利。大量活性炭的加入會削弱瓊脂的凝固能力，因此要多加些瓊脂。很細的活性炭容易沉淀，因此通常在瓊脂將要凝固時，需輕輕搖動培養(yǎng)瓶。

酚污染

解決方案：植物外植體組織在接種時的切割面會溢泌一些酚類物質，在接觸空氣中的氧氣后，其會氧化為相應的醌類物質，產生可見的茶色、褐色或黑色，此即謂“酚污染”。在木本植物，尤其是熱帶木本植物及少量草本植物中，此現象較為嚴重。